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编号:13613449
参知健脑方对缺氧致认知功能障碍大鼠脑线粒体损伤的保护机制研究(3)
http://www.100md.com 2017年5月15日 《世界中医药》 201710
     1.2.6 裂解组织提取蛋白及该蛋白浓度的测定 取出分离了好的线粒体进行组织裂解提取蛋白,11 000 r/min,4 ℃离心10 min,取沉淀去上清,加入Nacl重悬,超声破碎5次,10 s/次,计时30 min每隔5 min震荡1次,10 000 r/min,4 ℃离心10 min取上清待用。用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定线粒体中的蛋白浓度,严格按照说明书操作并计算浓度。

    1.2.7 大鼠脑线粒体APP、Aβ1-42、COX的含量和8-OHdG损伤的检测 将组织裂解提取出来的线粒体蛋白用酶联免疫吸附实验双抗体夹心法测定COX、8-OHdG的含量。在大鼠APP、Aβ1-42、COX、8-OHdG抗体包被的微孔中分别加入含APP、Aβ1-42、COX、8-OHdG的标准品和样品,与辣根过氧化物酶标记的APP、Aβ1-42、COX、8-OHdG抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,温育、洗涤、彻底洗涤后甲基联苯胺(TMB)显色,在反应终止前5 min内用酶标仪在450 nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。使用专业制作曲线软件Curve Expert1.3进行分析,计算出样本浓度。

    1.3 统计学方法 SPSS 17.0软件进行统计学处理。用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行组间比较 ......
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